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C3H 10T1/2 2A6 小鼠胚胎成纤维细胞概述

一、细胞基本信息

• 形态学：贴壁生长，呈长梭形或纺锤形，细胞轮廓清晰，核质比适中，具有成纤维细胞典型的 “漩涡状” 或 “放射状” 排列特征。
• 增殖能力：在适宜培养条件下可稳定传代，增殖速度较快，但仍保留接触抑制特性，密度过高时会停止分裂。
• 核型：接近二倍体核型，遗传背景相对稳定，适合需要保持细胞正常生物学特性的实验（如基因编辑、细胞分化研究等）。

二、培养与应用

• 培养基：常用高糖 DMEM 培养基，添加 10% 胎牛血清（FBS）、1% 双抗（青霉素 / 链霉素）。
• 环境：37℃、5% CO?培养箱，湿度维持在 95% 以上。
• 传代：当细胞密度达 80%-90% 时，用胰酶 - EDTA 消化液消化传代，建议传代比例 1:3-1:5，避免过度消化导致细胞损伤。
• 冻存：冻存液通常为 90% FBS+10% DMSO，程序降温后保存于 - 196℃液氮中。

1. 细胞分化研究：作为间充质干细胞的前体细胞，可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等，是研究中胚层细胞命运决定的经典模型。例如，通过添加地塞米松、IBMX（3 - 异丁基 - 1 - 甲基黄嘌呤）和胰岛素，可诱导其向脂肪细胞分化，用于肥胖症或代谢疾病机制研究。
2. 基因编辑工具验证：由于其易于转染（可通过脂质体转染或电穿孔法导入外源基因），常作为 CRISPR-Cas9 等基因编辑技术的靶细胞，用于验证 sgRNA 效率或构建基因敲除 / 过表达细胞系。
3. 细胞毒性检测：成纤维细胞对药物、纳米材料等外源物质敏感，可用于评估化合物的细胞毒性，为毒理学研究提供基础数据。
4. 共培养体系构建：与胚胎干细胞（ESCs）或诱导多能干细胞（iPSCs）共培养时，可作为饲养层细胞，提供生长因子（如 LIF）并维持干细胞的未分化状态，常用于干细胞培养体系的优化。

三、研究优势与局限性

• 来源明确：源于 C3H 小鼠（近交系），遗传背景清晰，实验结果重复性高。
• 功能多样：兼具增殖能力和多向分化潜能，适用场景广泛。
• 操作友好：培养条件相对简单，对实验室设备要求较低，适合基础研究使用。

• 永生化特性：虽非完全转化的癌细胞，但永生化过程可能导致部分基因表达异常，与原代 MEF 存在一定差异。
• 分化潜能限制：属于成纤维细胞谱系，向非间充质细胞类型（如神经细胞、上皮细胞）的分化能力有限。
• 种属差异：作为小鼠来源细胞，与人类细胞的分子机制存在差异，研究结果向临床转化时需谨慎验证。

四、典型研究案例

五、注意事项

• 污染防控：成纤维细胞对支原体、细菌污染敏感，建议定期进行支原体检测（如 PCR 法），并在培养中添加支原体清除剂（如 M-Plasmocin）。
• 批次管理：不同批次冻存的细胞可能存在生长状态差异，建议建立细胞库并记录传代次数（通常建议使用 20 代以内的细胞，避免老化）。