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一、细胞来源与历史背景

二、生物学特性

1. 形态与生长特性
   BHK-21 细胞贴壁生长时呈梭形或成纤维细胞样，细胞轮廓清晰，贴壁能力强，可在培养瓶表面形成均匀单层。在对数生长期，细胞倍增时间约为 12–24 小时，增殖速度快，适合大规模培养。
2. 分子与功能特征
   • 病毒易感性：对多种病毒（如痘苗病毒、单纯疱疹病毒、副流感病毒等）高度敏感，是研究病毒复制机制和制备病毒疫苗的理想模型。
   • 转染效率高：易于通过脂质体转染、电穿孔等方法导入外源基因，常用于重组蛋白表达和基因功能研究。
   • **性：作为非肿瘤源性细胞系，BHK-21 在疫苗生产中具有较低的致瘤性风险，符合生物制品**性要求。

三、培养方法与条件

1. 培养基与营养需求
   常用培养基为MEM（Minimum Essential Medium）或DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium），需添加 10%–15% 胎牛血清（FBS）提供生长因子，同时补充 1% 双抗（青霉素 / 链霉素）防止污染。pH 值需维持在 7.2–7.4，渗透压控制在 280–320 mOsm/kg。
2. 培养环境
   细胞需在 37℃、5% CO?的恒温培养箱中培养，湿度保持在 95% 以上。当细胞融合度达到 80%–90% 时，需进行传代：用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化液处理，轻柔吹打后按 1:3–1:5 比例接种至新培养瓶。
3. 冻存与复苏
   冻存液采用 “90% FBS+10% DMSO”，细胞密度调整为 1×10?–5×10? cells/mL，经程序降温（-80℃过夜后转入液氮）长期保存。复苏时需快速解冻（37℃水浴），离心去除冻存液后更换新鲜培养基，以减少 DMSO 对细胞的毒性。

四、应用领域

1. 病毒学研究与疫苗生产
   • 病毒增殖：BHK-21 是生产兽用疫苗（如口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗）的核心细胞系，因其高效支持病毒复制且易于大规模培养。
   • 病毒载体构建：用于制备腺病毒、慢病毒等基因治疗载体，或研究病毒与宿主细胞的相互作用机制。
2. 重组蛋白表达
   通过基因工程改造，BHK-21 可高效表达外源蛋白（如细胞因子、受体蛋白），尤其适用于需要翻译后修饰的复杂蛋白生产，部分重组蛋白已应用于生物制药领域。
3. 药物毒性与细胞生物学研究
   • 作为体外模型评估药物对哺乳动物细胞的毒性作用，检测细胞形态、增殖率或凋亡指标。
   • 用于研究细胞信号通路、细胞黏附机制及细胞周期调控等基础生物学问题。
4. 生物制品质量控制
   在疫苗和重组蛋白生产中，BHK-21 可用于病毒滴度测定、外源因子检测等质量控制环节，确保产品**性与有效性。

五、注意事项

• 细胞污染监测：定期检查细胞形态及培养基状态，避免细菌、真菌或支原体污染（可通过 PCR 或荧光染色检测）。
• 传代次数控制：长期传代可能导致细胞特性改变（如核型异常），建议使用低代次细胞（<20 代）进行关键实验。
• **性操作：涉及病毒培养时，需在生物**柜中操作，并遵循相应等级的实验室**规范。

总结